Page 18 - Juklak Deteksi PMK RBS di Propinsi Bebas Berbatas Pulau di Indonesia 2023
P. 18

III.2.3. Prosedur Pengujian
                        Pengujian yang dilakukan adalah Pengujian deteksi antigenik PMK dengan uji

                        qPCR PMK dan atau rtPCR, Pengujian serologi PMK dengan uji ELISA NSP PMK
                        yang digunakan dalam mendeteksi adanya kandungan antibodi terhadap protein
                        non-struktural  NSP  PMK  dalam  serum  hewan  yang  peka  PMK.  Pelaksanaan

                        serosurveilans  tetap  dilakukan  dengan  proporsi  yang  lebih  sedikit.
                        Serosurveilans  merupakan  persyaratan  yang  dibutuhkan  untuk  menyatakan

                        negara bebas PMK.

                        Protein NSP merupakan protein yang terdapat pada capsid virus Penyakit Mulut
                        dan Kuku (PMK). Capsid ini mengelilingi permukaan virus. Protein NSP virus PMK
                        dikode oleh gen 2AB, 2B, 2C, 3ABC dan 3D. Protein NSP ini tidak bereaksi dengan

                        serum hasil vaksinasi.

                        ELISA NSP PMK merupakan pengujian terhadap kandungan antibodi terhadap
                        protein non struktural PMK yang terdapat dalam serum hewan yang peka PMK.

                        Prinsip  dari  pengujian  ini  adalah  ELISA  competitive  untuk  mendeteksi  antibodi
                        terhadap protein non struktural 3ABC virus PMK dalam serum. Penggunaan NSP
                        untuk  menghindari  penggunaan  7  serotipe  secara  terpisah  serta  membedakan

                        hewan yang divaksinasi dan hewan yang terinfeksi virus PMK di lapangan.

                        III.2.3.1 Pengujian ELISA PMK Priocheck® FMDV NS ELISA Blocking
                        Plate  sudah  tercoated  dengan  3ABC  specific  monoclonal  antibody  (mAB)  dan

                        antigen  NSP  PMK  (antigen  NSP  captured  by  mAB).  Uji  ini  diawali  dengan
                        penambahan serum sampel kedalam well dalam test plate. Setelah inkubasi, test
                        plate dicuci dan dilanjutkan dengan penambahan konjugat. Apabila serum sampel

                        mengandung antibodi terhadap NSP PMK, maka antibodi ini secara spesifik terikat
                        pada 3ABC protein. Ikatan ini akan memblok ikatan mAB-HRPO. Setelah inkubasi,
                        test plate dicuci dan ditambahkan chromogen (TMB) substrat. Setelah inkubasi

                        pada  suhu  ruang  22±3°C  reaksi  warna  dihentikan  dengan  menggunakan  stop
                        solution. Perubahan warna diukur dengan panjang gelombang 450nm.

                        Komponen Kit


                        Komponen kit harus disimpan pada suhu 5±3°C sampai batas ekspirasi.

                        Komponen 1
                        Test plate berjumlah 10 plate






                                                              17
   13   14   15   16   17   18   19   20   21   22   23