Page 18 - Juklak Deteksi PMK RBS di Propinsi Bebas Berbatas Pulau di Indonesia 2023
P. 18
III.2.3. Prosedur Pengujian
Pengujian yang dilakukan adalah Pengujian deteksi antigenik PMK dengan uji
qPCR PMK dan atau rtPCR, Pengujian serologi PMK dengan uji ELISA NSP PMK
yang digunakan dalam mendeteksi adanya kandungan antibodi terhadap protein
non-struktural NSP PMK dalam serum hewan yang peka PMK. Pelaksanaan
serosurveilans tetap dilakukan dengan proporsi yang lebih sedikit.
Serosurveilans merupakan persyaratan yang dibutuhkan untuk menyatakan
negara bebas PMK.
Protein NSP merupakan protein yang terdapat pada capsid virus Penyakit Mulut
dan Kuku (PMK). Capsid ini mengelilingi permukaan virus. Protein NSP virus PMK
dikode oleh gen 2AB, 2B, 2C, 3ABC dan 3D. Protein NSP ini tidak bereaksi dengan
serum hasil vaksinasi.
ELISA NSP PMK merupakan pengujian terhadap kandungan antibodi terhadap
protein non struktural PMK yang terdapat dalam serum hewan yang peka PMK.
Prinsip dari pengujian ini adalah ELISA competitive untuk mendeteksi antibodi
terhadap protein non struktural 3ABC virus PMK dalam serum. Penggunaan NSP
untuk menghindari penggunaan 7 serotipe secara terpisah serta membedakan
hewan yang divaksinasi dan hewan yang terinfeksi virus PMK di lapangan.
III.2.3.1 Pengujian ELISA PMK Priocheck® FMDV NS ELISA Blocking
Plate sudah tercoated dengan 3ABC specific monoclonal antibody (mAB) dan
antigen NSP PMK (antigen NSP captured by mAB). Uji ini diawali dengan
penambahan serum sampel kedalam well dalam test plate. Setelah inkubasi, test
plate dicuci dan dilanjutkan dengan penambahan konjugat. Apabila serum sampel
mengandung antibodi terhadap NSP PMK, maka antibodi ini secara spesifik terikat
pada 3ABC protein. Ikatan ini akan memblok ikatan mAB-HRPO. Setelah inkubasi,
test plate dicuci dan ditambahkan chromogen (TMB) substrat. Setelah inkubasi
pada suhu ruang 22±3°C reaksi warna dihentikan dengan menggunakan stop
solution. Perubahan warna diukur dengan panjang gelombang 450nm.
Komponen Kit
Komponen kit harus disimpan pada suhu 5±3°C sampai batas ekspirasi.
Komponen 1
Test plate berjumlah 10 plate
17
