Page 20 - Juknis Deteksi PMK RBS di Propinsi Bebas Berbatas Pulau di Indonesia 2023

B. Prosedur Uji
1. Hari ke 1 Inkubasi Serum Sampel

• Masukkan 80 μl EB keseluruh well dari test plate (komponen 1)
• Masukkan 20 μl control negative (komponen 9) kedalam well A1 dan B1
• Masukkan 20 μl control positive lemah (komponen 8) kedalam well C1

dan D1
• Masukkan 20 μl control positive (komponen 7) kedalam well E1 dan F1

• Masukkan 20 μl serum sampel ke well G1 dan H1
• Tutup test plate dengan sealer

• Shake test plate dengan lembut
• Inkubasi semalam 16-18 jam pada 22±3°C

2. Hari ke 2 Inkubasi dengan conjugate

• Kosongkan test plate sesudah inkubasi dan cuci test plate 6x dengan
200-300 μl WS. Ketuk-ketuk test plate sampai bersih sesudah

pencucian terakhir
• Masukkan 100 μl CD kesemua well
• Tutup test plate dengan sealer

• Inkubasi 60±5 menit pada 22±3°C
• Kosongkan test plate setelah inkubasi dan cuci test plate 6x dengan

200-300 μl WS. Ketuk-ketuk sampai bersih setelah pencucian terakhir.
• Masukkan 100 μl chromogen (TMB) substrat (komponen 10) kesemua
well.

• Inkubasi 20 menit pada 22±3°C.

• Tambahkan 100 μl stop solusion (komponen 11) kesemua well.
• Campur isi test plate sebelum pembacaan.
Catatan : Penambahan stop solution dimulai 20 menit setelah well pertama

diisi dengan chromogen (TMB) substrat. Tambahkan stop solution
dengan jalan yang sama pada saat penambahan chromogen

(TMB) substrat.
Pembacaan Test

Ukur optical density (OD) dari well pada 450 nm dalam 15 menit setelah perubahan
warna dihentikan. Hitung rata-rata OD450 dari well A1 dan B1 (negative control=

OD450 max). Prosentase Inhibisi (PI) dari control dan serum sampel dihitung
dengan menggunakan.

19