Page 8 - SOP Uji ELISA SP PMK Serotipe O
P. 8
2.5 Prosedur Pengujian
Biarkan semua reagen mencapai suhu kamar (21±5°C) sebelum digunakan. Homogenisasi
semua reagen dengan inversi atau vortex.
1. Tambahkan:
✓ 50 μL Dilution Buffer 14 untuk setiap well.
✓ 20 μL Kontrol Positif ke well A1 dan B1.
✓ 20 μL Kontrol Negatif ke well C1 dan D1.
✓ 20 μL dari setiap sampel yang akan diuji ke well yang tersisa.
2. Tutup plate dan inkubasi selama 45±4 menit pada suhu 21 °C (±2°C).
3. Kosongkan wells. Cuci setiap well 5 kali dengan sekitar 300 μL Larutan Cuci 1X. Hindari
mengeringkan well di antara pencucian.
4. Siapkan Conjugate 1X dengan mengencerkan Concentrated Conjugate 10X hingga 1:10
dalam Dilution Buffer 13.
5. Tambahkan 100 μL Conjugate 1X ke masing-masing well.
6. Tutup plate dan inkubasi selama 30 menit ± 3 menit pada suhu 21±5 °C.
7. Kosongkan wells. Cuci setiap well 5 kali dengan setidaknya 300 μL Wash Solution. Hindari
mengeringkan wells di antara pencucian.
8. Tambahkan 100 μL Substrate Solution ke setiap well.
9. Tutup plate dan inkubasi selama 15 menit ± 2 menit pada suhu 21±5 °C dalam gelap
10. Tambahkan 100 μL Stop Solution ke setiap well untuk menghentikan reaksi.
11. Baca dan rekam OD pada panjang gelombang 450 nm
2.6 Hasil
Validasi
Pengujian divalidasi jika:
✓ Nilai rata-rata OD Kontrol Negatif (ODNC) lebih besar dari 0,7
ODNC > 0,7
✓ Nilai rata-rata OD Kontrol Positif (ODPC) kurang dari 30% dari ODNC
ODPC / ODNC < 0,3
SOP UJI ELISA SP PMK Serotipe O Balai Besar Veteriner Farma Pusvetma 2022 | 8
