Page 6 - SOP VN Test PMK
P. 6
Metode Titrasi Serum
1. Masukkan 75 µL media ke dalam well ke A dan well B sampai H diisi 50 µL media
2. Masukkan 25 µL serum secara duplo sesuai dengan penomorannya
3. Lakukan pengenceran mulai dari well A dst sampai well H, well ke 11 dan 12 bisa kita gunakan
untuk kontrol sel, media dan back titrasi
4. Masukkan 50 µL virus 100TCID50 ke dalam setiap well
5. Masukkan kedalam incubator CO2 selama 1 jam
6. Masukkan sel yang sudah dihitung dan split sebanyak 50 µL
7. Masukkan kedalam incubator CO2
8. Lakukan pengamatan selama 24 sampai 72 jam
2.4 HASIL
Kriteria yang Dapat Diterima
Tes dianggap valid asalkan:
1. Dosis virus yang diberikan (titer akhir dikurangi Challenge Dilution) berada dalam kisaran
1,5 hingga 2,5 TCID50.
2. Titer serum referensi berada dalam log10 0,3 dari rata-rata, pada dosis virus yang dapat
diterima (lihat di atas).
3. Lapisan sel dalam kontrol sel utuh dan tidak menunjukkan efek seperti CPE
Hasil untuk serum uji individu dianggap dapat diterima asalkan:
1. Dosis virus yang diberikan (lihat di atas) berada dalam kisaran 1,5 hingga 2,5 TCID50.
2. Kontaminasi atau toksisitas tidak mencegah serum uji terbaca secara akurat.
Interpretasi Hasil
Dengan asumsi kriteria penerimaan hasil terpenuhi, serum tes dianggap negatif jika memiliki
titer 1/11 atau kurang. Jika, karena volume serum uji yang kecil, pengenceran awal adalah 1/16
daripada 1/8, maka <16 diberikan sebagai hasil negatif. Sera juga dapat dinyatakan negatif
dengan titer tersebut jika dosis virus terlalu rendah, dan/atau jika titer serum referensi terlalu
tinggi. Hal ini didasarkan pada kondisi yang telah bias mendukung netralisasi terjadi. Sera
dengan titer lebih besar dari 1/11 tetapi kurang dari atau sama dengan 1/32 dianggap
meragukan dan dicatat sebagai “tidak meyakinkan” (hewan impor/ekspor harus dikeluarkan
darahnya kembali dan diuji ulang atau harus dilakukan pemeriksaan veteriner). Titer serum lebih
besar dari atau sama dengan 1/45 (1,65) dianggap positif.
SOP UJI NETRALISASI VIRUS (VNT) PMK Balai Besar Veteriner Farma Pusvetma 2023 | 6
