Page 9 - SOP Uji ELISA SP PMK Serotipe A
P. 9
4. Siapkan Konjugat 1X dengan mengencerkan Concentrate conjugate 10X hingga 1:10 dalam
Dilution Buffer 101.
5. Tambahkan 100 µL Konjugat 1X ke masing-masing well.
6. Tutup plate dan inkubasi 30 menit ± 3 menit pada 21±5 °C.
7. Kosongkan well. Cuci 5 kali dengan minimal 300 µL Wash Solution 1X. Hindari pengeringan well
di antara pencucian.
8. Tambahkan 100 µL Larutan Substrat ke setiap well.
9. Tutup plate dan inkubasi selama 15 menit ± 2 menit pada suhu 21±5 °C di tempat gelap.
10. Tambahkan 100 µL Stop Solution ke setiap well, dengan urutan yang sama seperti pada langkah
No. 8, untuk menghentikan reaksi
11. Baca dan hitung OD pada panjang gelombang 450 nm
6. HASIL
Pembacaan Hasil Tes
Lakukan pembacaan Optical density (OD) dengan panjang gelombang 450 nm.
Validasi
Tes dinyatakan valid, jika:
✓ Nilai OD Kontrol Negatif (ODNC) lebih besar dari 0.7
ODNC > 0.7
✓ Rasio nilai OD Kontrol Positif dan Negatif (ODPC dan ODNC) kurang dari 0.3
ODPC / ODNC < 0.3
Interpretasi
Masing-masing sampel dihitung Persentase Kompetisi/The Competition percentage (S/N %):
ODsampel - ODPC
S/N % = --------------------- x100
ODNC - ODPC
Sampel dengan S/N %:
✓ Kurang dari atau sama dengan 50% dianggap positif.
✓ Lebih dari 50% dianggap negatif.
SOP UJI ELISA SP PMK Serotipe A Balai Besar Veteriner Farma Pusvetma 2022 | 9
