Page 21 - Juklak Deteksi PMK RBS di Propinsi Bebas Berbatas Pulau di Indonesia 2023
P. 21

B.  Prosedur Uji
                           1. Hari ke 1 Inkubasi Serum Sampel

                             •    Masukkan 80 μl EB keseluruh well dari test plate (komponen 1)
                             •    Masukkan 20 μl control negative (komponen 9) kedalam well A1 dan B1
                             •    Masukkan 20 μl control positive lemah (komponen 8) kedalam well C1

                                  dan D1
                             •    Masukkan 20 μl control positive (komponen 7) kedalam well E1 dan F1

                             •    Masukkan 20 μl serum sampel ke well G1 dan H1
                             •    Tutup test plate dengan sealer

                             •    Shake test plate dengan lembut
                             •    Inkubasi semalam 16-18 jam pada 22±3°C

                           2.   Hari ke 2 Inkubasi dengan conjugate

                             •    Kosongkan test plate sesudah inkubasi dan cuci test plate 6x dengan
                                  200-300  μl  WS.  Ketuk-ketuk  test  plate  sampai  bersih  sesudah

                                  pencucian terakhir
                             •    Masukkan 100 μl CD kesemua well
                             •    Tutup test plate dengan sealer

                             •    Inkubasi 60±5 menit pada 22±3°C
                             •    Kosongkan test plate setelah inkubasi dan cuci  test plate 6x dengan

                                  200-300 μl WS. Ketuk-ketuk sampai bersih setelah pencucian terakhir.
                             •    Masukkan 100 μl chromogen (TMB) substrat (komponen 10) kesemua
                                  well.

                             •    Inkubasi 20 menit pada 22±3°C.

                             •    Tambahkan 100 μl stop solusion (komponen 11) kesemua well.
                             •    Campur isi test plate sebelum pembacaan.
                            Catatan : Penambahan stop solution dimulai 20 menit setelah well pertama

                                      diisi dengan chromogen (TMB) substrat. Tambahkan stop solution
                                      dengan  jalan  yang  sama    pada  saat  penambahan  chromogen

                                      (TMB) substrat.
                        Pembacaan Test

                        Ukur optical density (OD) dari well pada 450 nm dalam 15 menit setelah perubahan
                        warna dihentikan. Hitung rata-rata OD450  dari well A1 dan B1 (negative control=

                        OD450  max).  Prosentase  Inhibisi  (PI)  dari  control  dan  serum  sampel  dihitung
                        dengan menggunakan.




                                                              20
   16   17   18   19   20   21   22   23   24   25   26