Page 9 - SOP Uji ELISA NSP PMK

1. Kosongkan tes plate setelah inkubasi serum, kemudian cuci dengan washing solution sebanyak
200-300 µl, diulang 6 kali.

2. Masukkan 100 µl conjugate dilution ke semua sumuran dari test plate.
3. Tutup tes plate dengan sealer
4. Inkubasi selama 60±5 menit pada suhu 22±3 C
0

Inkubasi dengan Chromogen Substrat (TMB)
1. Kosongkan tes plate setelah inkubasi, kemudian cuci dengan washing solution sebanyak 200-
300 µl, diulang 6 kali

2. Masukkan 100 µl Chromogen Substrat (TMB) (komponen 10) ke semua sumuran dari test plate
(timer dinyalakan)

3. Inkubasi selama 20 menit pada suhu 22±3 C
0
4. Tambahkan Stop Solution (komponen 11) ke semua well
5. Goyangkan test plate dengan lembut agar bercampur

Pembacaan Hasil Test

Lakukan pembacaan Optical density (OD) dengan panjang gelombang 450 nm. Lakukan pembacaan
OD segera dan jangan melebihi 15 menit setelah penambahan stop Solution

2.5 HASIL

Perhitungan Hasil Test
● Perhitungan rata-rata OD450 dari sumuran A1 dan B1 (kontrol Negatif) merupakan OD450 Max

● Hasil pembacaan OD450 dari semua sampel dihitung dengan Presentasi Inhibisi (PI) dengan
rumus :
OD450 sample tes

PI = 100 - ------------------------- x100

OD450 Max

Interpretasi Hasil
Persyaratan validasi uji:

● OD450 Max (rata rata OD450 kontrol negatif ) harus >1,00
● Rata rata nilai PI dari kontrol positif lemah >50%
● Rata rata nilai PI dari kontrol positif >70%

SOP UJI NONSTRUCTURAL PROTEIN (NSP) PMK Balai Besar Veteriner Farma Pusvetma 2020 Rev 2022 | 9