Page 8 - SOP Uji Biomolekuler untuk PMK
P. 8
3.2.3 Interpretasi Hasil
Hasil dikatakan positif apabila nilai Ct value <40.
Hasil dikatakan negatif apabila nilai Ct value >50 atau Undeterminate.
Hasil dikatakan indeterminate atau borderline dan harus diuji ulang apabila nilai Ct value 40-
50.
4. UJI KONVENSIONAL PCR PMK (3D)
4.1. Alat dan Bahan
Bahan
1. QIAamp Viral RNA Mini Kit (Qiagen)
2. SuperScriptTM III One-Step RT-PCR Platinum Taq High Fidelity (Invitrogen)
®
3. 100 bp DNA Ladder (Invitrogen)
4. Agarose LE (Roche)
5. Sybr Safe (Invitrogen)
6. 3D forward primer: 5’-GCCTG-GTCTT-TCCAG-GTCT-3’
3D reverse primer: 5’-CCAGT-CCCCT-TCTCA-GATC-3’
Alat
BioSafety Cabinet, PCR Cabinet, Mikropipet, Sentrifus, Vortex, Spindown, Thermal cycler
(ProFlex PCR System, Applied Biosystems), Gel Documentation/High Performance Ultraviolet
Tranluminator (UVP).
4.2. Prosedur Uji
4.2.1 Ekstraksi RNA
1. Buffer AVL sebanyak 560 μl yang mengandung carrier RNA dengan perbandingan : volume
Buffer AVL 0,56 ml + carrier RNA-AVE 5,6 μl dimasukkan ke dalam tube 1,5 ml.
2. Tambahkan sampel sebanyak 140 μl, vortex 15 detik.
3. Inkubasi pada suhu ruang selama 10 menit.
4. Spin down sebentar.
5. Kemudian ditambahkan 560 μl Ethanol absolut, divortex 15 detik, lalu dilakukan spin
down.
6. Ambil 630 μl cairan dari step 5 lalu dimasukkan ke dalam spin column dan disentrifus
dengan kecepatan 8000 rpm selama 1 menit. Letakkan spin column pada tabung
penampung yang bersih, dan buang tabung penampung yang mengandung filtrat.
SOP UJI BIOMOLEKULER PMK Pusvetma 2020 Rev 2024 | 8
