Page 9 - SOP Uji Biomolekuler untuk PMK
P. 9
7. Ulangi step 6.
8. Tambahkan 500 μl Buffer AW1 kemudian disentrifus dengan kecepatan 8.000 rpm selama
1 menit. Letakkan spin column pada tabung penampung yang bersih, dan buang tabung
penampung yang mengandung filtrat.
9. Tambahkan 500 μl Buffer AW2 kemudian disentrifus dengan kecepatan 14.000 rpm
selama 3 menit.
10. Rekomendasi: Letakkan spin column pada tabung penampung yang bersih, dan buang
tabung penampung yang mengandung filtrat. Sentrifus dengan kecepatan 14.000 rpm
selama 1 menit.
11. Letakkan spin column ke tube 1,5 ml dan buang tabung penampung yang mengandung
filtrat.
12. Tambahkan 60 μl Buffer AVE dan diinkubasi pada suhu ruang selama 1 menit lalu
disentrifus dengan kecepatan 8.000 rpm selama 1 menit.
4.2.2 Pembuatan PCR Reaction Mix, Penambahan Template dan Amplifikasi DNA
1. Pengerjaan pembuatan PCR Reaction Mix dilakukan di PCR Cabinet.
2. Tabung PCR disiapkan sejumlah sampel yang akan diuji ditambah dengan kontrol positif
dan kontrol negatif.
3. Dalam pembuatan PCR Reaction Mix harus dalam keadaan dingin.
4. Tabung untuk PCR Reaction Mix disiapkan dan masukkan reagen 2X Reaction Mix
sebanyak 12,5 µl dikalikan jumlah reaksi yang dikehendaki.
5. Tambahkan reagen nuclease-free water sebanyak 7,5 µl dikalikan jumlah reaksi yang
dikehendaki.
6. Tambahkan primer Forward 20 µM sebanyak 0.5 µl dikalikan jumlah reaksi yang
dikehendaki.
7. Tambahkan primer Reverse 20 µM sebanyak 0.5 µl dikalikan jumlah reaksi yang
dikehendaki.
8. Tambahkan reagen Superscript III RT Platinum Taq Mix sebanyak 1 µl dikalikan jumlah
reaksi yang dikehendaki.
9. PCR Reaction Mix sebanyak 22 µl dibagi ke sejumlah tabung PCR yang sudah disiapkan.
10. Tambahkan RNA template (sampel uji / kontrol positif / kontrol negatif) sebanyak 3 µl ke
dalam tabung PCR yang sudah berisi PCR Reaction Mix 22 µl sehingga jumlah total
menjadi 25 µl.
SOP UJI BIOMOLEKULER PMK Pusvetma 2020 Rev 2024 | 9
