Page 10 - SOP Uji Biomolekuler untuk PMK
P. 10
11. Vortex agar tercampur homogen.
12. Dilakukan spin down.
13. Masukkan ke dalam mesin thermal cycler dengan program sebagai berikut :
1x suhu 50ºC selama 30 menit
1x suhu 95ºC selama 2 menit
30x suhu 95ºC selama 15 detik, 55°C selama 30 detik dan suhu 68ºC selama 1
menit
1x suhu 68ºC selama 1 menit
Hold suhu 4ºC ∞
4.2.3 Running Gel Elektroforesis
1. Timbang agarose sebanyak 1 gram.
2. Tuang ke dalam tabung / gelas erlenmeyer 250 ml.
3. Tambahkan 100 ml 1x TBE Buffer.
4. Didihkan sampai larut dalam microwave selama ± 4 menit, sambil sesekali digoyang
untuk meyakinkan terlarut dengan merata.
5. Agarose dituang dalam tray yang telah dipasang sisir.
6. Pada agarose ditambahkan 5 µl SybrSafe dalam 100 ml agar.
7. Agarose gel dibiarkan sampai mengeras.
8. Setelah gel mengeras dimasukkan ke dalam elektroforesis chamber.
9. TBE Buffer 1X dituang sampai gel terendam seluruhnya.
10. Marker sebanyak 2 µl ditambah dengan Loading Dye sebanyak 1 µl dimasukkan ke dalam
well agarose paling kiri.
11. Kontrol negatif, produk PCR dan kontrol positif sebanyak 5 µl masing-masing dicampur
dengan Loading Dye sebanyak 1 µl dimasukkan ke dalam well agarose dimulai dari kontrol
negatif kemudian sampel dan terakhir kontrol positif.
12. Membuat catatan urutan sampel untuk setiap well.
13. Chamber ditutup kemudian dihubungkan dengan power supply.
14. Power supply dinyalakan pada posisi 100 volt selama 30 – 45 menit, setelah itu dimatikan.
15. Komputer Gel Documentation, kamera dinyalakan.
16. Masukkan gel hasil running ke dalam Gel Documentation dan power dinyalakan.
17. UV pada Gel Documentation dinyalakan.
18. Klik “Capture” yang ada pada komputer untuk memotret hasil running gel.
4.2.4 Interpretasi Hasil
Hasil dikatakan positif apabila menunjukkan adanya band yang jelas pada posisi 328 bp.
SOP UJI BIOMOLEKULER PMK Pusvetma 2020 Rev 2024 | 10
